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MGECs細(xì)胞凍存時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的凍存培養(yǎng)基。
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng):小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng):MGECs細(xì)胞
貨號(hào):LZ-X969980
規(guī)格:T25
生長(zhǎng)特性:貼壁
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
Sorensen磷酸緩沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate;表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯縮酶(ADOLASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
Sorensen磷酸緩沖液(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate;表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒
Sorensen磷酸緩沖液(10×,pH6.2)Epimedin A;朝藿定A染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)*試劑盒(包括抗體)
TBS緩沖液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A;朝藿定A人類(lèi)巨病蛋白酶(HCMV PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測(cè)試劑盒
TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B;朝藿定B人體鼻病(rhinovirus)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒
Tris-Maleate緩沖液(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B;朝藿定B人體鼻?。╮hinovirus)定性檢測(cè)試劑盒
Tris-Maleate緩沖液(1mol/L,pH5.0-8.5)Epmedin C;朝藿定C人體腺?。╝denovirus)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒
Tris-Maleate緩沖液(1mol/L,pH5.0-8.5)Epmedin C;朝藿定C人體腺?。╝denovirus)定性檢測(cè)試劑盒
阿拉伯膠水溶液(10%)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態(tài)染色試劑盒
阿拉伯膠水溶液(25%)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
緩沖液(5×,pH7.4)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
鈉緩沖液(pH7.4)Erythromycin;紅霉素溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性染色試劑盒
鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin;紅霉素肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin;紅霉素肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE I)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
鈉緩沖液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol;β-雌二肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶II(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE II)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
MGECs細(xì)胞XII B組磷脂酶A2(PLA2G12B)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人瘤病16型E7抗體
髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病58 E6蛋白抗體
黑素轉(zhuǎn)鐵蛋白(MFI2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病16抗體
抗酸性磷酸酶(ACP5)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病18 E7抗體
甲狀腺原氨酸(Thyronine)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病31 E7抗體
脂聯(lián)素(ADP/Acrp30)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子HES2抗體
集聚蛋白(AGRN)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子HES3抗體
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞,并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè),這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。